尊龙凯时的细胞培养及处理指南旨在为研究人员提供系统、实用的细胞培养方案。以下是详细的培养、传代及冻存步骤，确保细胞在实验室内外均可保持最佳的生长状态。

培养条件

在细胞培养过程中，适宜的培养条件至关重要。尊龙凯时推荐以下培养气相和培养基配方：

• 气相：95%空气 + 5%二氧化碳
• 温度：37℃
• 培养基：MEM + 10% FBS + 1% P/S

细胞传代方法

对于细胞传代，若细胞汇合度未超过80%，应将培养液收集至离心管，并留5ml以继续生长。如果细胞密度超过80%，则可进行传代。

建议首次传代采用1:2的比例。具体传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS轻轻洗涤细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞状态后加入完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，转移至15ml离心管中，在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分至两个T25瓶中，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5% CO2培养箱中。

细胞冻存步骤

在需要长时间保存细胞时，遵循以下步骤进行细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶面积达到80%时，弃去培养液，PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，直至观察到细胞收缩变圆后，加入完全培养基终止消化。
3. 将细胞转移至离心管中，离心后弃去上清，加入1ml 尊龙凯时提供的无血清冻存液，混匀后加入冻存管。
4. 将冻存管直接放入-80℃的冰箱中保存，24小时后可转入液氮罐中。

细胞复苏步骤

细胞复苏的操作需谨慎进行，以下是详细的步骤：

1. 从液氮中取出冻存管，尽快置入37℃的水浴中解冻，直至无结晶出现。
2. 用75%酒精消毒冻存管的外壁，然后将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中。
3. 在1000rpm离心5分钟后，弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞。
4. 接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱中培养，并于第二天更换新鲜完全培养基。

注意事项

在细胞运输过程中，可能会出现细胞脱落的情况。遇到此问题时，务必将培养液收集至离心管中进行处理，确保细胞健康生长。尊龙凯时致力于提供最佳的细胞培养解决方案，以保证细胞实验的成功。